Upośledzona funkcja przywspółczulności zwiększa podatność na nieswoiste zapalenie jelit w mysim modelu depresji ad 8

Zwierzęta pozostawiono do odzyskania na poduszce rozgrzewającej. Innej grupie myszy wstrzyknięto ip pełną dawkę rezerpiny. Test ogonowy. Opóźnienie bezruchu i całkowity czas trwania bezruchu indukowanego przez zawiesinę ogonową mierzono zgodnie ze sposobem opisanym przez Steru et al. (49) jako łatwy sposób oceny potencjalnych leków przeciwdepresyjnych. Myszy zawieszono na patyku 50 cm nad podłogą za pomocą taśmy klejącej umieszczonej w przybliżeniu cm od końca ogona. Czas bezruchu rejestrowano w okresie 6 minut (50). Zwierzę uważano za nieruchome, gdy nie wykazywało żadnego ruchu ciała i powieszono go biernie. Zachowanie oceniano 2 dni przed operacją i 8 dni po operacji lub 2 dni przed i 6 godzin po ostrej iniekcji rezerpiny. Indukowanie zapalenia okrężnicy typu DSS i DNBS. DSS (MW, 40 kDa, ICN Biomedicals Inc.) dodano do wody pitnej w końcowym stężeniu 5% (wag./obj.) Przez 5 dni (20). Kontrole były dopasowywane w czasie i składały się z myszy, które otrzymywały tylko normalną wodę pitną. Średnie zużycie DSS odnotowano na klatkę każdego dnia. W celu przeprowadzenia badania DNBS myszy znieczulono za pomocą Isoflurane (Abbott). Rurkę PE-90 o długości 10 cm (ClayAdam) przymocowaną do strzykawki tuberkulinowej wstawiono do okrężnicy w odległości 3,5 cm. Zapalenie jelita grubego indukowano przez podawanie 4 mg DNBS w 100 ml roztworu (ICN Biomedicals Inc.) w 30% etanolu i pozostawiono na 3 dni (51). Myszy kontrolne (bez zapalenia okrężnicy) otrzymywały roztwór soli fizjologicznej. Myszy z zapaleniem jelita grubego zaopatrywano w 6% sacharozę w wodzie pitnej, aby zapobiec odwodnieniu. Eksperymentalny protokół. Test ogonowy wykonano 2 dni przed operacją. VXP i umieszczenie pompy mikroosmotycznej wykonano w dniu operacji. Myszy testowano na zachowanie podobne do depresji w 8. dniu po operacji. Ekspozycja na DSS (5%) rozpoczęła się w dziewiątym dniu po operacji i kontynuowano przez 5 dni. W oddzielnych eksperymentach nikotynę (20 .g / ml) dodano do wody pitnej w dniu 4 po operacji i przez 5 dni po indukcji zapalenia okrężnicy u myszy w trybie wagotomicznym (52). Jak opisano wcześniej (7) DMI podawano ip w dawce 15 mg / kg przez 12 dni, rozpoczynając 2 dni po operacji. Ekspozycja na DNBS (4 mg) rozpoczęła się jedenastego dnia po operacji przez 3 dni. Ocena ciężkości zapalenia okrężnicy. DAI. Wyniki DAI historycznie dobrze korelowały ze zmianami patologicznymi w wywołanym przez DSS modelu IBD (53). DAI to łączny wynik utraty masy ciała, konsystencji stolca i krwawienia. Wyniki zostały zdefiniowane następująco: utrata masy ciała, 0, bez utraty; 1, 5%, 10%; 2, 10%. 15%; 3, 15%, 20%; 4, 20%; konsystencja stolca, 0, normalny; 2, luźny stolec; 4, biegunka; krwawienie, 0, brak krwi; 2, obecność krwawienia; i 4, całkowite krwawienie (Hemoccult II, Beckman Coulter). DAI oceniano od dnia 0 do dnia 5 podczas leczenia DSS. Oznaczenie CRP w surowicy. Krew pobierano 5 lub 3 dni po rozpoczęciu leczenia DSS lub DNBS, odpowiednio, przez nakłucie wewnątrzsercowe u znieczulonych myszy (izofluranowych). Poziomy CRP określono przy użyciu zestawu do testów ELISA (R & D Systems). Wyniki makroskopowe. Pięć dni po rozpoczęciu DSS lub 3 dni po rozpoczęciu leczenia DNBS myszy zabijano, a jamę brzuszną otwarto, okrężnicę umiejscowiono, a obserwowano rozdęcie, płynność, przekrwienie i rumień. Okrężnicę usunięto i otwarto podłużnie, a makroskopowe uszkodzenie natychmiast oceniono na całej długości okrężnicy. Oceny makroskopowe wykonano przy użyciu opisanego wcześniej systemu punktacji dla zapalenia okrężnicy DSS (53) i dla DNBS (54). Histologia okrężnicy i aktywność MPO. Segmenty okrężnicy utrwalone formalnie, pochodzące z zgięcia śledziony, były zatopione w parafinie, a skrawki 3. M wybarwiono H & E. Uszkodzenie okrężnicy oceniono na podstawie opublikowanego systemu oceny, który uwzględnia zniekształcenia architektoniczne, zubożenie komórek kubkowych, obrzęk / owrzodzenie i stopień nacieku komórek zapalnych (53). Aktywność MPO określono według ustalonego protokołu (55). Pokrótce, aktywność MPO, stosowaną jako marker nacieku granulocytów, zmierzono przy użyciu zmodyfikowanej wersji metody opisanej przez Bradley i in. (56). Próbki tkanek homogenizowano (50 mg / ml) w 50 mM lodowatym buforze fosforanu potasu (pH 6,0) zawierającym 0,5% bromku heksadecylotrimetyloamoniowego (Sigma-Aldrich). Homogenat zamrażano 3-krotnie, krótko sonikowano, a następnie odwirowywano przy 12000 rpm przez 12 minut w temperaturze 4 ° C. Supernatant następnie dodano do roztworu O-dianizydyny (Sigma-Aldrich) i nadtlenku wodoru
[patrz też: kardiomed ursus, limitki aflofarm, ekspandowany co to znaczy ]