Upośledzona aktywność mitochondrialna u potomstwa opornego na insulinę u pacjentów z cukrzycą typu 2 cd

Ponadto poddano badaniom spektroskopii rezonansu magnetycznego 1H w celu określenia zawartości triglicerydów w wątrobie i mięśniach. Następnie badani przebadali hiperinsulinemiczno-euglikemiczne badanie zaciskowe, aby ocenić reakcję wątroby, mięśni i tkanki tłuszczowej na badania insuliną lub spektroskopią rezonansu magnetycznego 31P w celu oceny szybkości fosforylacji mięśni mitochondrialnych i stosunku nieorganicznego fosforanu do fosfokreatyny. Ze względu na złożoność protokołu nie wszyscy badani byli w stanie ukończyć zarówno spektroskopię rezonansu magnetycznego, jak i badania klamrowe. Dwóch z 12 osób kontrolnych, które początkowo zakwalifikowano na podstawie ich wskaźnika wrażliwości na insulinę, zostały następnie wykluczone po badaniu z użyciem hiperinsulinemiczno-euglikemicznym, które określiło je jako oporne na insulinę, podczas gdy u wszystkich osób, u których stwierdzono insulinooporność na podstawie Stwierdzono również, że wskaźnik wrażliwości na insulinę jest odporny na insulinę na podstawie badania clamp. Pisemną zgodę uzyskano od każdego z badanych po tym, jak wyjaśniono cel, charakter i potencjalne komplikacje badań. Protokół został zatwierdzony przez komitet badający ludzi Uniwersytetu Yale.
Dieta i przygotowanie do nauki
Pacjentom polecono spożywać regularną dietę podtrzymującą wagę, zawierającą co najmniej 150 g węglowodanu dziennie przez trzy dni przed przyjęciem do badania spektroskopowego z użyciem klamry lub rezonansu magnetycznego. Wszyscy badani zostali poinstruowani, aby nie wykonywać żadnych ćwiczeń innych niż normalne chodzenie przez trzy dni przed badaniem. Aby zminimalizować zmiany w metabolizmie glukozy wynikające z hormonalnego działania jajników, badane kobiety badano podczas fazy pęcherzykowej (dni od 0 do 12) cyklu menstruacyjnego. 23 Osoby zostały przyjęte do ośrodka badań klinicznych szpitala Yale-New Haven wieczorem przed badanie metodą spektroskopii magnetycznego rezonansu cęgowego lub 31P i badani kontynuowali post, mając jednocześnie swobodny dostęp do regularnej wody pitnej aż do zakończenia badania następnego dnia.
Pomiar metabolitów i hormonów
Stężenie glukozy w osoczu mierzono za pomocą analizatora YSI 2700 STAT (Yellow Springs Instruments). Stężenie insuliny, glukagonu, adiponektyny i rezystyny w osoczu mierzono za pomocą zestawów radioimmunologicznych z podwójnym przeciwciałem (Linco). Osoczowy czynnik martwicy nowotworu . i interleukiny-6 mierzono za pomocą zestawów Quantine High Sensitivity (R & D Systems). Stężenie kwasu tłuszczowego w osoczu oznaczono metodą mikrofluorometryczną.24 Zawartość azotu w moczu zmierzono w Mayo Medical Laboratories (Rochester, Minnesota). Stężenia glicerolu w mikrodializacie (w próbkach 0,5 .l) mierzono za pomocą kolorymetrii związanej z enzymem za pomocą mikrodializera CMA 600 (Microdialysis) .25 Stężenia etanolu oznaczano enzymatycznie za pomocą analizatora STAT YSI 2700 STAT25. Analizy spektrometrii masowej wzbogacania [6,6-2H2] glukozy i [2H5] glicerolu w osoczu zostały wykonane przy użyciu detektora selektywności masowej Hewlett-Packard (model 5971A), jak opisano wcześniej.
Spektroskopia rezonansu magnetycznego zawartości wewnątrzglobulkowej i wewnątrzwątrobowej trójglicerydów
W oddzielnym dniu, po 12-godzinnym postu, wszyscy badani zostali przetransportowani wózkiem inwalidzkim do Centrum Rezonansu Magnetycznego Yale, a zlokalizowane widma spektroskopii rezonansu magnetycznego 1H mięśniówki płaszczkowatej i wątroby uzyskano za pomocą spektrometru Biospec 2.1-T (Bruker Instruments) ), jak opisano wcześniej.25
Badania cęgów hiperinsulinemiczno-euglikemicznych
Podstawowy wskaźnik rotacji glukozy i glicerolu oceniano podczas trzygodzinnego okresu podstawowego, a wskaźniki stymulowane insuliną oceniano za pomocą trzygodzinnego klamry hiperinsulinemiczno-euglikemicznej przy użyciu 20 mU insuliny na metr kwadratowy powierzchni ciała na minutę [6,6-2H2] glukozę i [2H5] glicerol, jak opisano powyżej. 26 Stężenie energetyczne całego ciała i utlenianie glukozy i tłuszczu oceniano za pomocą kalorymetrii pośredniej (Deltratrack Metabolic Monitor, Sensormedics) w ciągu ostatnich 30 minut 3-godzinny okres linii podstawowej i podczas ostatnich 30 minut okresu klamrowego.27 Zlokalizowane wskaźniki lipolizy in vivo zostały ocenione przed i podczas procedury zaciskania przy użyciu sond do mikrodializy (CMA / 60, CMA, Microdialysis) do złogów tłuszczu w dwóch miejscach na brzuchu, 4 do 6 cm poniżej pępka, jak opisano wcześniej.25
Spektroskopia rezonansu magnetycznego w fosforylacji mitochondrialnej
Szybkości fosforylacji mitochondriów oceniano za pomocą transferu nasycenia magnetycznego rezonansu magnetycznego 31P wykonywanego przy 36,31 MHz z użyciem płaskiej, koncentrycznej sondy wykonanej z wewnętrznej cewki o średnicy 9 cm (dla 31P) i 13 cm zewnętrznej cewki dostosowanej do częstotliwości protonowej do obrazowania harcerstwa i shimmingu, jak opisano wcześniej. 28 Jednokierunkowe wskaźniki syntezy ATP
[podobne: buprenorfina, bupropion, ambroksol ]
[przypisy: promazyna, donepezil, cyprofloksacyna ]
[więcej w: limitki aflofarm, ug zaleszany, igor michajłowski ]