Powielanie genu BRAF stanowi mechanizm aktywacji szlaku MAPK w gwiaździakach o niskim stopniu złośliwości ad 6

Ponadto stwierdzono silną regulację w górę mRNA BRAF i ekspresję białka we wszystkich guzach niosących duplikację locus BRAF. Odkrycia te są niezwykłe, ponieważ genetyka molekularna gwiaździaków o małym stopniu złośliwości u dzieci, w szczególności gwiaździaków pilocytarnych, była w dużej mierze nieznana. Poza obserwacją kliniczną, że pacjenci NF1 mają zwiększone ryzyko wystąpienia tych nowotworów, nie zaobserwowano konsekwentnego występowania w przypadku sporadycznych gwiaździaków żadnej innej aberracji genetycznej. Podczas gdy gwiaździaki pilocytowe związane z NF1 wykazują utratę i dezaktywację alleli NF1, sporadyczne gwiaździaki pilocytarne nie mają mutacji NF1 lub obniżonej ekspresji NF1 (39). Neurofibromina, produkt genu NF1, bierze udział w represji sygnalizacji MAPK przez jej domenę GTPase (12). Co ciekawe, nie wykrywając duplikacji genu BRAF, Jones et al. (10) zidentyfikowali niewielki przyrost liczby kopii locus RAF1 przy 3p25 w gwiaździaku gwiaździakowym (10). Jednak ta wada wydaje się być rzadka, ponieważ nie została wykryta w żadnym z guzów badanych w naszym badaniu. W dwóch innych badaniach stwierdzono rzadkie mutacje aktywujące KRAS w gwiaździakach o niskim stopniu złośliwości (22, 23). Dlatego szczególnie interesujące jest, że BRAF jako składnik tej samej ścieżki jest aktywowany przez duplikacje lub aktywację mutacji w około połowie sporadycznych gwiaździaków pilocytarnych i rozlanych odpowiednio w skali I lub II według WHO. Chociaż ułamek pacjentów wykazujących nawrót nowotworu i / lub złośliwy postęp był zbyt niski, aby umożliwić korelację między stanem BRAF a odsetkiem przeżycia, stwierdziliśmy, że duplikacje BRAF są częściej spotykane w gwiaździakach z lokalizacją nie-mostkową oraz w guzach od pacjentów z resztkami guza po operacji, przy znacznej części tych pacjentów wymagających leczenia adiuwantowego. Aktywacja dalszych celów ścieżki sygnalizacyjnej RAS / RAF. Po zidentyfikowaniu duplikacji lub mutacji BRAF jako częstego zdarzenia w gwiaździakach o niskim stopniu złośliwości, byliśmy zainteresowani badaniem dalszych efektorów szlaku MAPK, takich jak ERK1 / 2 i CCND1. Fosforylację ERK1 / 2 obserwowano we wszystkich zbadanych gwiaździakach dziecięcych na różnych poziomach, co sugeruje konstytutywną aktywację szlaku MAPK w tych nowotworach, prawdopodobnie obejmującą aberracje genetyczne lub epigenetyczne, które jeszcze nie zostały odkryte w tych nowotworach, w których nie wystąpiły zmiany BRAF. MRNA CCND1 było nie tylko wysoce nadwyrażane w większości nowotworów w stosunku do nieneoplastycznej tkanki mózgowej, ale także wykazywało znacząco wyższe poziomy w guzach z duplikacją BRAF w porównaniu z nowotworami zachowującymi zwykłe 2 kopie tego genu. Rola BRAF w dojrzałych gwiaździakach o niskim stopniu złośliwości. Badanie statusu liczby kopii BRAF w gwiaździakach o niskim stopniu złośliwości od dorosłych pacjentów ujawniło także wysoki odsetek guzów z powieleniem BRAF (23%). Ponadto duże genomowe zyski chromosomu 7q z locus BRAF występowały w 38% przypadków. Jest to zgodne z innymi badaniami opisującymi trisomię chromosomu 7 jako powszechną aberrację genomową w dorosłych gwiaździakach o niskim stopniu złośliwości (40, 41). Wpływ dublowania BRAF w patogenezie gwiaździaków u dorosłych i związek między zmianą BRAF a innymi zmianami genetycznymi w gwiaździakach rozlanych, np. Mutacjach TP53, pozostaje do ustalenia. Szlak MAPK stanowi potencjalny cel leku w gwiaździakach o niskim stopniu złośliwości. Aby dostarczyć pierwszych przedklinicznych dowodów na potencjalną rolę specyficznych farmakologicznych inhibitorów szlaku MAPK w dostosowanym leczeniu gwiaździaków o niskim stopniu złośliwości, wykorzystaliśmy 4 linie komórkowe ustalone z pierwotnych glejaków o niskim stopniu złośliwości. We wszystkich 4 liniach komórkowych stwierdzono znaczne zmniejszenie proliferacji komórek nowotworowych po leczeniu pojedynczą dawką inhibitora MEK1 / 2 U0126 w różnych stężeniach. Ponadto obserwowane szybkie defosforylowanie ERK1 / 2 i silna regulacja w dół ekspresji mRNA CCND1 wskazują na skuteczne hamowanie szlaku MAPK in vitro. Aby zbadać poziom apoptozy po leczeniu U0126, przeprowadziliśmy analizę cyklu komórkowego i barwienie aneksyną V. Analiza cyklu komórkowego ujawniła zatrzymanie w fazie G2 / M i brak wzrostu frakcji apoptotycznej po leczeniu lekiem. Jest to zgodne z ustaleniami innych autorów, którzy wykazali, że aktywacja MAPK jest konieczna do przejścia G2 / M i że hamowanie MEK1 / 2 prowadzi do zatrzymania G2 / M (42. 45). Barwienie aneksyną V, które jest zdolne do wykrywania wczesnych komórek apoptotycznych, wykazało podobny poziom komórek V aneksyny aneksyny przy hamowaniu MEK1 / 2. Stwierdzenie BRAF w komórkach gwiaździaka pilocytarnego wywołuje zatrzymanie wzrostu w fazie G2 / M
[przypisy: citodent kielce, ekspandowany co to znaczy, usg agatowa ]