Mysi model zespołu Costello ujawnia stan nadciśnienia z udziałem III Ang cd

W płucach komórki Clara, zidentyfikowane przez immunobarwienie przeciwciałami CC10, również wykazywały silne barwienie X-gal (Suplementowa Figura 5, A i B). Jednak niewielka część pneumocytów typu II, zidentyfikowanych przez immunobarwienie przeciwciałami SPC, wykazywała aktywność g-galu (dodatkowa Figura 5, A i C). Nie wiadomo, czy jest to spowodowane niskim poziomem ekspresji H-Ras w tych komórkach. Na koniec, narządy krwiotwórcze, takie jak śledziona i grasica, wykazywały niski poziom ekspresji H-Ras (dane nie pokazane). Szczegółowe porównanie wzoru ekspresji H-RasG12V, określonego przez barwienie X-gal, u myszy H-RasG12V ujawniło podobny wzór ekspresji (dane nie pokazane). Sugeruje to, że ekspresja onkogennego białka H-RasG12V nie zakłóca co najmniej istotnie wzorca ekspresji endogennego locus H-Ras. Analiza molekularna szlaków sygnałowych H-Ras. Zmutowane białko H-RasG12V zostało związane z GTP, co określono na podstawie jego zdolności do oddziaływania z domeną wiążącą Ras c-Raf (Figura 1B). Jak się spodziewano, ilość H-RasG12V. GTP była dwukrotnie większa niż u myszy H-RasG12V / G12V, jak u zwierząt H-Ras + / G12V. Poziomy ekspresji elementów Ras w dół, w tym Erk1, Erk2, Mek1 i Akt, były stałe we wszystkich badanych tkankach, w tym w całych zarodkach, niezależnie od ilości obecnego białka H-Ras związanego z GTP (Figura 1B i Figura 2). Nieoczekiwanie poziomy ufosforylowanych Erk1, Erk2, Mek1 i Akt były również identyczne we wszystkich badanych tkankach, niezależnie od tego, czy białko H-Ras było nieaktywne (H-Ras związany z GDP + / +) lub aktywne (H-Ras związany z GTP + / G12V i H-RasG12V / G12V). Poziomy aktywacji tych dalszych elementów były również podobne do poziomów występujących w H-Ras. /. myszy, z wyjątkiem fosforylowanej Akt, która była nieznacznie obniżona w mózgu, ale nie w sercu lub nerkach (Figura 1B i Figura 2). Ostatecznie poziomy aktywacji tych elementów Ras w oczyszczonych subpopulacjach kardiomiocytów i fibroblastów pochodzących z serc noworodków były również podobne (Figura 2B). Obserwacje te wskazują, że pomimo ekspresji konstytutywnie aktywnych białek H-RasG12V związanych z GTP, główne szlaki sygnałowe Ras nie są aktywowane u myszy H-Ras + / G12V i H-RasG12V / G12V, co sugeruje istnienie mechanizmów negatywnego sprzężenia zwrotnego, które kontrolować poziomy sygnalizacji Ras. Figura 2H-Ras sygnalizacji w sercu i nerkach myszy zmutowanych H-RasG12V. Ekstrakty białkowe (40 .g) uzyskane z (A) serca i nerek 2-miesięcznych myszy H-Ras. / A, H-Ras + / +, H-Ras + / G12V i H-RasG12V / G12V oraz z ( B) kardiomiocyty i fibroblasty wyizolowane z serc noworodków zwierząt H-Ras + / + i H-RasG12V / G12V rozdzielono przez SDS-PAGE, przeniesiono na błonę nitrocelulozową i przeniesiono na przeciwciała przeciw H-Ras i niefosforylowane i ufosforylowane formy Erk1. / 2, Mek1 i Akt. GAPDH został użyty jako kontrola obciążenia. Myszy H-RasG12V nie są podatne na rozwój nowotworu. Chociaż pacjenci z CS mają pewne predyspozycje do rozwoju nowotworu, nowotwory. głównie nerwiaki niedojrzałe, mięśniakomięsaki prążkowane i raki pęcherza moczowego. zaobserwowano u około 10% pacjentów z CS (30). Nie wiadomo, czy dorosli pacjenci z CS mają większą częstość występowania nowotworów. Spośród myszy z mutacją H-RasG12V, 19 z 20 pozostawało wolnych od guza przez co najmniej 1,5 roku, niezależnie od tego, czy nosili docelowy allel w heterozygotyczności lub homozygotyczności. Jednak dziewicze i wielopłodne samice H-RasG12V konsekwentnie rozwijały przerost w gruczołach sutkowych w wieku około 4 miesięcy (ryc. 3). Ten fenotyp charakteryzował się wyższym rozgałęzieniem przewodowym i proliferacją pęcherzyków płucnych, a także niewielkim spadkiem tkanki tłuszczowej. Zaobserwowano również większy rozwój zewkrzasto-lobulinowy i ektazję przewodową, z łagodnym zwłóknieniem okołoprzewnowo-pęcherzykowym (Figura 3). Jednak te gruczoły sutkowe nie wykazywały atypii, zwiększonego indeksu mitotycznego lub objawów płaskiej metaplazji w nabłonku (Figura 3, D. F). W wieku 1,5 roku, z 9 samic myszy rozwinęło gruczolakoraka sutka. Guz ten wykazywał uderzającą atypię, martwicę geograficzną i wysoki indeks mitotyczny (dodatkowa figura 6). Immunowe barwienie za pomocą cytokeratyny 8 (dodatkowa postać 6), cytokeratyny 14 i markerów pankeratyny AE1a AE3 (dane nie pokazane) zilustrowano jego nabłonkowe pochodzenie. Dodatkowe immunobarwienie ujawniło ekspresję receptora estrogenu a, receptora progesteronowego (dane nie pokazane) i ogniskowe wykrywanie fosforylowanego Erk (dodatkowa Figura 6). Figura 3 Rozrost gruczołu śluzowego u dziewiczych samic myszy H-RasG12V. Zabarwienie czerwonego karminu na całej górze (A. C) i barwienie H & E odcinków parafiny (D. F) gruczołów sutkowych H-Ras + / + (A i D), H-Ras + / G12V (B i E) i H -RasG12V / G12V (C i F) myszy
[przypisy: mzo ostrów, naclof, kardiomed ursus ]